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Ames试验
发布时间:2021-3-11 19:07:44 浏览次数:
 

         三项遗传毒性实验——细菌回复突变试验(Ames试验)、微核试验、染色体畸变

         基因毒性是指能直接或间接杀伤细胞DNA的性质。如香烟烟雾中的苯并芘具有基因毒性(genotoxic)。这种物质可致突变,可使原癌基因(proto-oncogenes)和肿瘤抑制基因(genes)发生改变。


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  应用标准
  ISO 10993-3
  GB/T 16886.3 
  OCED471 
  OECD473 
  OECD474 
  OECD476


  Ames实验
  中文名称:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验
         实验目的和原料:
 
         鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的组氨酸营养缺陷型(his-)菌株,在含微量组氨酸的培养基中,除极少数自发回复突变的细胞外,一般只能分裂几次,形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后,大量细胞发生回复突变,自行合成组氨酸,发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用,在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶,可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。

  哺乳动物细胞体外基因突变试验

         实验目的和原理:
 
         TK基因的产物胸苷激酶在体内催化从脱氧胸苷(TdR)生成胸苷酸(TMP)的反应。在正常情况下,此反应并非生命所必需,原因是体内的TMP主要来自于脱氧尿嘧啶核苷酸(dUMP),即由胸苷酸合成酶催化的dUMP甲基化反应生成TMP。但如在细胞培养物中加入胸苷类似物(如三氟胸苷,即TFT——trifluorothymidine),则TFT在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸,进而掺入DNA,造成致死性突变,故细胞不能存活。若TK基因发生突变,导致胸苷激酶缺陷,则TFT不能磷酸化,亦不能掺入DNA,故细胞在含有TFT的培养基中能够生长,即表现出对TFT的抗性。根据突变集落形成数,计算突变频率,以判定受试物的致突变性。
 
  哺乳动物细胞体外染色体畸变试验

  实验目的和原理:
 
  染色体畸变分为染色体结构畸变和数目畸变,染色体结构畸变又分为缺失、短片、互换等。
 
  在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使培养的哺乳动物细胞暴露于受试物中,用中期分裂相阻断剂(如秋水仙素或秋水仙碱)处理,使细胞停止在中期分裂相,随后收获细胞,制片,染色,分析染色体畸变。
 
  小鼠骨髓细胞微核实验
   
  实验目的和原理:
 
  微核是在细胞的有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时,仍然留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝粒片段或环。它在末期以后,单独形成一个或几个规则的次核,被包含在细胞的胞质内而形成,由于比核小得多,故称微核。
    
 

  Ames试验

 

  ICH推荐的标准遗传毒性试验组合

 

  组合一

 

  a.细菌回复突变试验

 

  b.体外染色体畸变试验或体外微核试验或体外小鼠淋巴瘤tk试验,这三个试验可以任选其中一个。

 

  c.体内微核试验或体内骨髓细胞染色体畸变试验;动物给药后取外周血淋巴细胞做细胞遗传学分析也可接受,但不常用。

 

   

 

  组合二

 

  a.细菌回复突变试验

 

  b.用两种不同组织做体内遗传毒性评估,通常包含体内微核试验和另一个体内试验。第二个体内试验通常选择评估动物肝脏DNA链断裂。

 

  细菌回复突变试验是与致癌物检测最相关的体外试验。

 

   

 

  细菌回复突变(Ames)试验
   

 

  用于检测DNA损伤引起的基因突变。通过检测受试物在测试菌株某些特殊构建的突变体上引起突变的能力,即造成菌株从组氨酸/色氨酸依赖型向原养型突变,判断受试物是否为致突变剂。

 

  试验需在加和不加s9代谢活化系统条件下同时进行。

 

  ※在培养细菌的琼脂培养基中加入痕量的组氨酸或色氨酸,允许细菌前几个小时生长,表现为背景菌苔。当加入的组氨酸/色氨酸用尽后,只有发生了突变的细菌才可以继续生长成为肉眼可见的回复突变菌落。

 

   

 

  不同类型的Ames试验

 

   

 

  


 
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